Laboratorio Clinico Maria del Pilar

contacto@laboratoriomariadelpilar.com

Solicita exámenes a domicilios

Urocultivo

Detectar cualquier indicio de infección urinaria con el fin de orientar el tratamiento adecuado en los pacientes ya sean recién nacidos, niños o mujeres embarazadas, poblaciones más susceptibles a este tipo de enfermedades.

CONDICIONES DE LA MUESTRA REQUERIDA

 Las muestras deben ser procesadas tan pronto llegan al laboratorio.
A los cultivos polimicrobianos se les debe solicitar nueva muestra, teniendo en cuenta el manual de toma de muestras.

METODOLOGÍA

Identificación: Colorimetría y fluorescencia
Antibiograma: Turbidimetría y colorimetría

VALORES DE REFERENCIA

 Negativo

PROCEDIMIENTO

EQUIPO HB&L

a. Realizar diariamente el Check list, que es la garantía de que los láseres están funcionando correctamente, realizar este procedimiento con el equipo libre de viales en el incubadora, por lo tanto no se debe estar procesando ninguna muestra.
b. Realizar mantenimiento diario y semanal del equipo.
c. Revisar número de pruebas cargadas en el analizador, siempre que abra una caja de viales cargue inmediatamente la tarjeta en el analizador por la opción check code o Smart card.
d. Organizar los caldos HB&L en la gradilla metálica y con el papel de filtro nuevo.
e. No tocar, ni marcar los viales de urocultivo por debajo de la línea blanca, pueden afectar la lectura de los láseres y obtener resultados falsos
positivos.
f. Realizar la identificación de muestras correctamente.
g. Sembrar 500 ul de orina previamente mezclada en caldo HB&L de cada una de las muestras en cámara de flujo laminar o al lado de un mechero.
h. No tocar la tapa de los viales con el dedo o el guante, solamente tomarlo de la parte superior.
i. Al realizar la programación de muestras usar el protocolo adecuado (muestras sin ácido bórico y con ácido bórico).
j. Introducir los viales en el equipo HB&L en la posición adecuada que muestra el analizador en la pantalla, evitar la alarma MISSING en el analizador, esto hace que se pierdan pruebas cargadas en la tarjeta y al final no coinciden con el número de viales.
k. A las 4 horas revisar los recuentos según punto de corte, cuando los recuentos aparezcan en la pantalla resaltados en color amarillo y no en color azul, repicar en cromo agar, los cultivos sin recuento se consideran negativos.
l. No sacar los viales antes de las 4 horas de incubación, se pierde la información de la curva.
m. Procesar el control de calidad con cepas ATCC por lo menos una vez al mes, hacer una suspensión 0.5 de Mac Farland y hacer montaje de un vial verde con 500 uL de la cepa, programarla como una muestra. Los resultados esperados deben ser mayor o igual a 100.000 UFC/ml.
Imprimir y guardar reporte.

EQUIPO PHOENIX M50

a. Realizar mantenimiento del equipo: Entrar por la Tablet del equipo opción status: Entrar con el usuario y clave correspondiente, se activa la barra de herramientas, opción Mantenimiento, Hardware, Led verdes ejecutar, abre el candado en la Tablet y abro puerta del equipo y reviso encendido verde de los leds del equipo, cierro puerta, igual con leds rojos, leds ámbar y apagado de leds, reviso encendido de Leds externos del equipo y alarmas.
Por ultimo en el computador en la barra de herramientas en la opción barras de colores reviso estado del instrumento, revisar que haya pasado todas las calibraciones y salir.
b. Montaje de paneles
• Selecciono paneles a utilizar:
– MIC-700 para solo susceptibilidad cuando séqué tipo de bacteria Gram negativa es y voy a realizar solo antibiograma.
– MIC/ID-700 Para susceptibilidad e identificación Gram negativos.
– PMIC/ID Para susceptibilidad e identificación Gram Positivos.
– SMIC/ID Para susceptibilidad e identificación Streptococcus agalactiae y Streptococcus pneumoniae.

• Equipo lector de escala de Macfarlán calibrado y se realiza control diario con las escalas 0.25, 0.5 y 1.0 utilizando solo una escala por día.
• Saque el panel de la bolsa, utilice el panel en el plazo de 2 horas tras sacarlo de la bolsa.
• Coloque el panel en la estación de inoculación con los puertos de inoculación en la parte superior.
• Etiquete el tubo de caldo para ID Phoenix con el número de la muestra del paciente.  Utilizando técnica aséptica, tome de las medias colonias de la misma morfología, con la punta de asa o escobillón estéril.
• Inocule las colonias en el caldo para ID PHOENX y mezcle.
• Introduzca el tubo tan pronto como sea posible en el nefelómetro CrystalSpec.
• Realizo escala de Macfarlán 0.48 a 0.52 máximo 0.55 con cada una de las cepas a procesar.
• Se debe utilizar la suspensión bacteriana en un plazo de 60 segundos después de su preparación.
• Etiquete el tubo de caldo AST Phoenix con el número de la muestra del paciente, añada por caída libre una gota de indicador respectivo previamente mezclado y atemperado al caldo AST y mezclar 3 veces.
• Si los tubos están expuestos a la luz, se deben utilizar en el plazo de 2 horas después de añadir el indicador.
• Utilizando una pipeta, transfiera 25ul de la suspensión bacteriana estandarizada del tubo ID al tubo AST de cada una de las cepas, mezclar 6 veces o 12 veces para Estreptococos.
•  Vierta el inoculo del tubo ID Y del tubo AST en el puerto de llenado en el lado respectivo para cada uno. Deje que el líquido baje por las vías antes de moverlo.
• Tape el pan el con las tapas respectiva y asegúrese de que los pocillos estén llenos, se deben cargar los paneles en el instrumento Phoenix dentro de los 30 minutos siguientes a su inoculación.
c. Análisis de paneles QC
• Inocule los paneles con las cepas control ATCC.
• Registre el panel como un panel QC, así:
 En la Tablet del equipo
– Presione la tecla registro de paneles.
– Presione la tecla panel QC.
– En el campo N° Secuencia, escanear o escribir el número de secuencia del panel.
– En el campo N° Acceso, escanear o escribir el nombre de la cepa o número.
– En el campo Cepa del Test, presione la tecla? Para desplegar el cuadro de selección del organismo para QC.
– En el campo N° de Lote Caldo ID, escriba o escanee el número de lote del caldo y fecha de caducidad.
– En el campo N° de Lote de Caldo AST, escriba o escanee el número de lote del caldo y fecha de caducidad.
– En el campo N° Lote Indicador AST, escriba o escanee el número de Lote del indicador y fecha de caducidad.
– Presione la tecla guardar para guardar la información
– Coloque el panel en el instrumento.
– Cuando se termina el análisis del panel, los resultados se revisan en la pantalla de resultados del panel.
d. Registro de paneles
• Presione la tecla registro de paneles.
• En el campo N° Acceso, escanear o escribir el número de acceso.
• En el campo N° Secuencia, escanear o escribir el número de secuencia del panel.
• En el campo N° Aislado pasa de manera predeterminada al aislado número 1.
• Presione las teclas ? o ? para aumentar o disminuir el número, los números de aislados validos son del 1 al 20.
• Presione la tecla guardar para guardar la información.
• Coloque el panel en el instrumento.
• En ATHIS por la opción ingreso, encuesta parámetros, ingreso el número del paciente respectivo y le doy guardar.
• Verifico en la ventana de transmisión del PHOENIX que cada paciente guardado por encuesta parámetros sea transmitido en la ventana.
• En el Epicenter del computador del equipo coloco a cada paciente Urocultivo “positivo” por la opción TEST y por la opción Aislamiento el Rto de colonias y guardar.
e. Lectura de paneles 
• A las 14 horas de procesados los paneles, se realiza la revisión y validación de los paneles por el segundo icono de la barra de herramientas del Epicenter.
• Busco cada uno de los pacientes, por la opción TEST reviso el ID y por la opción Aislamiento reviso el A/B, valido el resultado, lo guardo y con el clic derecho escojo la opción transmitir a LIS.
• En ATHIS reviso cada uno de los resultados transmitidos y lo valido.
f. Calibración de Nefelómetro BD PhoenixSpec
El Nefelómetro PhoenixSpec debe calibrarse:
• Cada tres meses.
• Tras el cambio de lámpara.
• Cuando la verificación diaria de los registros de los controles de calibración del calibrador PhoenixSpec 0.25 lee fuera de rango de 0.23-0.27 o el de 0.50 lee fuera de calibración 0.45-0.55
• Según lo dictado por la experiencia del laboratorio o de su política.

INSTRUCCIONES

1. Presione el botón de encendido del Nefelómetro PhoenixSpec.
2. Inserte el calibrador PhoenixSpec 0.25 en la cámara de lectura.
3. Presione el botón de calibración: La pantalla mostrara parpadeando S1.
4. Presione el botón de lectura:
• La pantalla hará una cuenta regresiva de 10 a 1.
• La pantalla mostrará parpadeando S2.
5. Remover el calibrador PhoenixSpec 0.25.
6. Inserte el calibrador PhoenixSpec 1.0.
7. Presione el botón de lectura:
• La pantalla hará una cuenta regresiva de 10 a 1.
• La pantalla mostrara parpadeando S3.
8. Remover el calibrador PhoenixSpec 1.0.
9. Inserte el calibrador PhoenixSpec 4.0.
10. Presione el botón de lectura
• La pantalla hará una cuenta regresiva de 10 a 1.
• La pantalla mostrara parpadeando S1.
11. Presione el botón de calibración.
12. Remover el calibrador PhoenixSpec 4.0.
• La calibración esta ahora completa.



UTILIDAD DIAGNOSTICA DE LA PRUEBA

En el Urocultivo tienen significado clínico los recuentos entre 10.000-100.000 colonias por mL en muestras tomadas por catéter o punción suprapúbica. Los recuentos de 100.000 o más
colonias por mL representan cultivo positivo del gérmen identificado y significan infección urinaria que requiere tratamiento con antibiótico de acuerdo al antibiograma informado. Los antibióticos se informan de acuerdo a su nombre genérico y no se utilizan nombres comerciales en los paneles para gérmenes Gram (+) y Gram (-). En general debe haber correlación positiva entre lo hallado en el uroanálisis y el resultado del cultivo. Un diagnóstico presuntivo de infección urinaria se puede hacer por el examen microscópico de la orina cuando se demuestre un número anormal de leucocitos y de bacterias en el sedimento y el tipo de bacteria a la coloración de gram. Se recomienda que la muestra para urocultivo se tome antes de la iniciación de la terapia antibiótica. El agente etiológico más frecuente en la infección urinaria es el Escherichia coli (>80%) seguido de Proteus, Klebsiella, Enterobácter, Pseudomona, Staphilococcus y Enterococcus

MATERIALES Y REACTIVOS

• Caldos de cultivo HB&L.
• Gradilla para montaje de urocultivos.
• Tiras de papel.
• Pipeta de 500 uL.
• Medios de cultivo Cromógeno
• Medios de cultivo agar sangre y agar Mackonkey
• Asas bacteriológicas calibradas de 20 uL
• Placas de identificación y A/B para Gram negativos (combo y/o solo susceptibilidad), Gram positivos y para Estreptococos.
• Caldos ID y AST
• Indicador para Gram positivos y Gram negativos.
• Indicador para Estreptococos.
• Pipeta de 25 uL.
• Soportes de montaje y transporte de placas.